PVA-Glutaraldehyde as support for lectin immobilization and affinity chromatography / PVA-Glutaraldeído como suporte para imobilização de lectina e cromatografia de afinidade

Immobilized lectins are a powerful biotechnological tool for separation and isolation of glycoconjugates. In the present study, polyvinyl alcohol (PVA) and glutaraldehyde (GA) were used as a support for Concanavalin A (Con A) covalent immobilization and for entrapment of Parkia pendula seed gum (PpeG). Con A immobilization yielded approximately 30% and 0.6 M glucose solution was the minimum concentration able to elute fetuin from column. PVA-GA-PpeG column was efficiently recognized by pure P. pendula lectin (PpeL) . These findings indicate that PVA-GA interpenetrated network showed to be an efficient support for lectin covalent immobilization and as affinity chromatography matrix after trapping of PpeG.

Lectinas imobilizadas são uma poderosa ferramenta biotecnológica para a separação e isolamento de glicoconjugados. No presente trabalho álcool polivinílico (PVA) e glutaraldeído (GA) foram utilizados como um suporte para a imobilização covalente da Concanavalina A (Con A) e para aprisionamento da goma de semente de Parkia pendula (PpeG). A eficiência da imobilização da Con A foi aproximadamente 30 % e a concentração mínima de glucose capaz de eluir a fetuína da coluna foi 0,6 M. Coluna de PVA - GA - PpeG foi eficientemente reconhecida pela lectina de P. pendula (PpeL) pura. Estes resultados indicam que a rede interpenetrada de PVA-GA mostrou-se um suporte eficiente para a imobilização covalente de lectina e como matriz de cromatografia de afinidade após aprisionamento de PpeG.

Prognostic and predictive biomarkers for hypoxic regions on breast cancer: advances and challenges / Biomarcadores preditivos e prognósticos em regiões hipóxicas do câncer de mama: avanços e desafios

Hypoxia has been extensively studied in solid tumors mainly in breast cancers and it is commonly associated with chemotherapy and radiotherapy resistance. Hypoxia inducible factor (HIF)-1α is responsible for hypoxia in the tumor microenvironment and its molecular mechanisms as well as its therapeutic strategies have been described. However, a few investigations in the literature deal with its role in the hypoxic environment at diagnosis with the aim to guide therapeutic approaches. This study alerts researchers in pathology and oncology to the importance of assessing area extension as well as specific biomarkers, inasmuch as molecules reactive to hypoxia may indicate response to antiangiogenic therapy. The extension of hypoxic areas may alter the choice of therapeutic approach, insofar as some antiangiogenic treatments may considerably aggravate patient's clinical course since they create a hypoxic environment.

A hipóxia vem sendo bastante estudada nos tumores sólidos, principalmente nos de mama, os quais são frequentemente responsáveis pela resistência a quimioterapia e radioterapia. O hypoxia inducible factor (HIF)-1α é o principal responsável pela hipóxia no microambiente tumoral e seus mecanismos moleculares têm sido descritos, além de estratégias terapêuticas desenhadas para essa molécula. Porém, poucos estudos na literatura tratam do papel do microambiente hipóxico no momento do diagnóstico para colaborar com a conduta dos oncologistas. Este artigo alerta os pesquisadores em patologia e oncologia para que eles observem a importância da avaliação da extensão da área, bem como dos biomarcadores específicos para esse ambiente, já que moléculas responsivas à hipóxia podem ser indicativas de resposta à terapia antiangiogênica. A extensão das áreas hipóxicas pode mudar a decisão do oncologista na escolha da conduta terapêutica, visto que alguns tratamentos antiangiogênicos podem piorar consideravelmente a evolução clínica do paciente por criar um ambiente hipóxico.

CONA and UEA-I ligands during tooth development reveals differences between human and rodents models and shows the beginning of mineral extracelular matrix secretion / Ligandos CONA y UEA-I revelan diferencias entre humanos y en modelos roedores durante el desarrollo dental y muestran el comienzo de la secreción de la matriz mineral extracelular

Many of Glycobyological aspects of human development remain still unclear, mainly in oral science, and this could be observed in a lack of literature with few and old papers about this subject. During tooth histo-morphogenesis changes occur in basement membrane composition, expression of signaling molecules and in localization of cell surface components, where glyco components could be involved. In this sense, this work aimed to analyze the ConA ligands commonly founded in glycoproteins cores and UEA-I ligands since fucolization is a Key event in many physiological and pathological processes. Therefore 15 jaws of human fetuses were ethically obtained, histologicaly processed and then submitted to lectin histochemistry with appropriated controls. The results showed that lectins staining increase their intensity during dental development; ConA only starts to recognize glucose/mannose residues on ectomesechymal cells in the crow phase revealing its ligands when the enamel matrix starts to be secreted. Interestingly, Con A ligands were not founded in the basement membrane of the stratum intermedium of the enamel differing from rodents models. The staining pattern of UEA-I was different, starting to be positive in the ectomesenchyma since the bud stage and shown variable expression in cell type and staining intensity, which appeared be directly proportional to the progress of odontogenesis. Thus, this work shows that Con A and UEA-I exhibit a growing staining directly proporcional to ameloblasts and odontoblasts cytodiferenciation and revels some glycan differences between human odontogenesis and rodents models...

Los aspectos glicobiológicos del desarrollo humano siguen siendo poco investigados, sobre todo en odontología, y esto puede ser observado en la literatura por los escasos y antiguos artículos sobre el tema. Durante la histomorfogénesis del diente se producen cambios en la composición de la membrana basal, en la expresión de moléculas de señalización y en la localización de la superficie celular de los componentes, donde los glico componentes podrían estar involucrados. Este trabajo tuvo como objetivo analizar los ligandos de la ConA ya que glucosa/manosa son comúnmente encontrados en núcleos de glicoproteínas y ligandos de la UEA-I debido a fucolización es un evento clave en muchos procesos fisiológicos y patológicos. Fueron obtenidas 15 mandíbulas de fetos humanos, procesadas y tratadas mediante histoquímica de lectinas con controles apropiados. Los resultados mostraron que la intensidad de tinción de las lectinas aumenta durante el desarrollo del diente. ConA sólo comienza a reconocer residuos de glucosa/manosa en células ectomesénquimales en la fase de corona revelando cuando la matriz de esmalte empieza a ser secretada. Curiosamente, ligandos de la ConA no se encontraron en la membrana basal de la capa intermedia del esmalte, difiriendo de los modelos de roedores. El patrón de tinción de la UEA-I fue diferente, empieza a ser positivo en el ectomesenquima desde la etapa de brotación y muestra variable expresión en el tipo de célula y la intensidad de la tinción, que parecía ser directamente proporcional al progreso de la odontogénesis. Por lo tanto, este trabajo demuestra que la Con A y la UEA-I presentan una coloración que crece directamente proporcional a citodiferenciación de los ameloblastos y odontoblastos, y revela algunas diferencias entre el estándar glicano de odontogénesis humanos y los modelos roedores...

Análise da expressão de carboidratos no estroma do carcinoma ductal invasivo da mama e sua correlação com dados clínicos e histopatológicos / Carbohydrates expression analysis in stroma of breast invasive ductal carcinoma and its correlation with clinical and histopathological datas

Objetivos: Analisar o perfil de carboidratos no estroma do carcinoma ductal invasivo, usando histoquímica com lectinas, e correlacionar os achados com dados clínicos e histopatológicos. Métodos: Estudo retrospectivo baseado na análise dos casos de 30 pacientes diagnosticados com carcinoma ductal invasivo durante o período de Maio a Outubro de 2008, As mostras tumorais foram submetidas a histoquímica com lectinas, na qual foram utilizadas as lectinas conjugadas à peroxidase: PNA-Per, 25 mg/mL, UEA-I-Per, 40 mg/mL e Con A-Per, 40 mg/mL específicas para D-galactose, L-fucose e glicose/manose, respectivamente. Posteriormente, os achados histoquímicos foram relacionados com os dados clínicos e histopatológicos (idade, invasão linfonodal, status para p53, tamanho tumoral e variante histológica) das pacientes. Resultados: Na histoquímica com lectinas, a Con A reconheceu a matriz extracelular em 53,33% dos casos, enquanto a PNA e a UEA-I reconheceram 30 e 40%. Já o endotélio de vasos sanguíneos foi mais reconhecido pela UEA-I (40% dos casos) que a Con A (10% dos casos). Biópsias de pacientes cuja matriz extracelular foi reconhecida pela Con A foram positivas também para p53 (p = 0,029), e todos os casos positivos para p53 (p = 0,041) tiveram os respectivos endotélios vasculares reconhecidos por essa lectina. O reconhecimento do estroma pela UEA-I em relação à variante histológica pouco diferenciada mostrou-se significativo (p = 0,034) em relação às demais variáveis analisadas. Conclusões: Os resultados indicaram o potencial das lectinas como sondas eficientes e os glicoconjugados de estroma como biomarcadores ou fonte de informações da biologia tumoral do carcinoma ductal invasivo.

Objectives: To analyze the carbohydrates profile in the stroma of invasive ductal carcinoma, using lectin histochemistry, and correlate the findings with clinical and histopathological data. Methods: Retrospective study based on analysis of 30 cases from patients previously diagnosed with invasive ductal carcinoma during the period from May to October 2008. Tumour samples were subjected to the lectin histochemistry technique, in which the peroxidase-conjugated lectins were used: PNA-Per, 25 mg/mL, UEA-I-Per, 40 mg/mL e Con A-Per, 40 mg/mL specifics for D-galactose, L-fucose and glucose/mannose respectively. Subsequently the histochemical findings were correlated with clinical and histopathological data (age, lymph node invasion, status to p53, tumor size and histological variant) of the patients. Results: In lectin histochemistry, the Con A stained the extracellular matriz of 53.33% of cases, while the PNA and UEA-I recognized 30 and 40% of the ECM, respectively. The blood vessels endothelium was most recognized by the lectin UEA-I (40%) than Con A (10%). Biopsies from patients with ECM stained by Con A were also positive for p53 (p = 0.029), and all positive cases to p53 (p = 0.041) had the respective endothelium recognized by the same lectin. The ECM staining by the UEA-I in relation to poorly differentiated histological variant showed a significant difference (p = 0.034) between the variants analyzed. Conclusions: The results indicated the potential of lectins as efficient probres and stromal glycoconjugates as biomarker or source of information in the diagnosis of invasive ductal carcinoma.

Correlação epidemiológica entre fungos queratinofílicos isolados do solo e agentes de dermatomicoses / Epidemiological correlation between keratinophilic fungi isolated from soil and dermatomycosis agents

Este trabalho teve como objetivo isolar e identificar os fungos queratinofílicos do solo e correlacioná-los com os agentes de dermatomicose. De acordo com nossos resultados, o predomínio de Trichophyton tonsurans como agente de dermatomicose em crianças na cidade do Recife, PE deve-se provavelmente ao maior contato destas com o solo.

This study had the aim of isolating and identifying keratinophilic fungi from soil and correlating them with dermatomycosis agents. According to our results, the predominance of Trichophyton tonsurans as a dermatomycosis agent among children in the city of Recife, PE, is probably due to children's greater contact with soil.

Carbohydrates detection in the hepatic egg - granuloma system using lectin histochemistry

This study aims to evaluate the egg-granuloma system in hepatic tissues using lectin histochemistry in experimental Schistosomiasis. Eight Swiss mice were infected with a local strain of Schistosoma mansoni, being submitted forty days later to a perfusion after which slices of liver were prepared. The tissue samples were incubated with the following peroxidase conjugated lectins: Peanut agglutinin (PNA), Wheat Germ agglutinin (WGA), and Concanavalin A (Con A). All lectins recognized the glycoconjugates in the adult worm tegument. In the hepatic tissue, WGA presented the highest staining followed by PNA and Con A. The PNA presented the most intense staining of the egg-granuloma system while WGA stained the hepatic sinusoid cells and Con A bound preferentially the fibrosis rings of granuloma and the surrounding hepatic parenquima. WGA and PNA indicated the presence of residues of N-acetyl-glucosamine and galactose in the surface of Schistosoma mansoni eggs in the hepatic granulomas. In conclusion, using PNA, Con A and WGA our study presented different aspects of the egg-granuloma and Tegument of Schistosoma mansoni as well as indicated differences in the peri-ovular granulomas indicating alterations in the cellular mechanism of expression of surface carbohydrates during progression of the Schistosomiasis.

El objetivo del estudio fue evaluar el sistema de los huevos de los granulomas en los tejidos hepáticos, utilizando histoquímica de lectinas esquistosomiasis. Ocho ratones suizos experimentales fueron infectados con una cepa local de Schistosoma mansoni y luego a los cuarenta días fueron sometidos a la perfusión y se prepararon cortes de hígado. Las muestras de los tejidos fueron incubadas con las siguientes peroxidasas lectinas conjugadas: aglutinina de maní (PNA), aglutinina de germenn de trigo (WGA), Concanavalin A (Con A). Todas las lectinas reconocieron las glicoconjugadas en el tegumento del gusano adulto. El tejido hepático con WGA presentó mayor coloración seguido de PNA y Con A. El PNA presentó la más intensa tinción de los huevos mientras el granuloma del sistema WGA tiñó las células hepáticas sinusoides y las Con A estuvieron siempre presentes en los anillos de la fibrosis y alrededor de los granulomas hepáticos del parénquima. WGA y PNA indicaron la presencia de residuos de N - acetil - glucosamina y galactosa en la superficie de los huevos de Schistosoma mansoni en los granulomas hepáticos de esquistosomiasis.

Estudo comparativo da expressão de carboidratos no sitema ovogranuloma hepático na esquistossomose humana e experimental / Comparative study on carbohydrate expression in hepatic egg-granuloma system in human and experimental schistosomiasis

Em virtude das lesões granulomatosas em animais e humanos aparentemente demonstrarem as mesmas alterações histológicas, poucas dados existem sobre as alterações patobioquímicas relacionadas aos carboidratos expressos pelos tecidos parasitados pelo S. mansoni. Neste trabalho, os resultados indicam que todas as lectinas testadas evidenciaram padrões de marcação diferenciados no tegumento do ovo do parasita e no granuloma periovular. A lectina WGA (Wheat germ agglutinin) apresentou uma intensa marcação do sistema ovo-granuloma (SOG) na esquistossomose experimental, enquanto que nas amostras teciduais humanas a WGA, LTA (Lotus tetragonolobus agglutinin) e PNA (Peanut agglutinin) marcaramapenas o ovo de S. mansoni. A lectina UEA-I (Ulex europaeus agglutinin) marcou de forma incipiente e inespecífica o SOG; por outro lado, a LTA marcou preferencialmente os anéis de fibrose do granuloma hepático em humanos. Houve intensa marcação da WGA no SOG e no ovo de S. mansoni, enquanto que a PNA marcou apenas o ovo do parasita, o qual indica a presença de resíduos de n-acetil-glucosamina e galactose, respectivamente. As lectinas WGA, PNA e Con A (Concanavalin agglutinin) falharam na distinção de tipos celulares encontrados no granuloma tanto experimental como humano. Conclui-se que a análise histoquímica com o uso de lectinas é uma ferramenta útil na investigação de alterações bioquímicas específicas que caracterizam a esquistossomose humana e experimental.

Avaliação histoquímica da mucosa gastrointestinal de ratos expostos ao álcool / Histochemical avaliation of the gastrointestinl mucosa of rats exposed to alcohol

Objetivo: avaliar através da histoquímica com lectinas a expressão de glicosaminoglicanos (mucinas) nas células do trato gastrointestinal de ratos expostos ao etanol. Método: ratos foram expostos ao etanol (3 g/kg do peso) durante 15, 30 e 45 dias. Após a perfusão, o estômago e o intestino fixados em formalina tamponada a 10% e fragmentos desses órgãos emblocados em parafina. Os cortes histológicos (4µm) foram incubados com lectil1as (PNA, WGA e ConA) conjugadas à peroxidase. A marcação das lectinas se revelou com o DAB-H202. seguida pela contra-coloração com hematoxilina. Os métodos Periodic acid-shiff (PAS) e Alcian blue foram usados para avaliar a expressão de glicosaminoglicanos (mucinas). Resultados: verificou-se que na mucosa gástrica a expressão das mucinas aumentou progressivamente durante a exposição ao etanol, conforme o aumento do número de células PAS e Alcian blue positivas. Por outro lado, na mucosa intestinal nenhuma diferença considerável se observou no número dessas células. Todas as lectinas testadas apresentaram um aumento no padrão de marcação relacionado ao maior período de exposição ao etanol. A PNA foi a mais seletiva das lectinas, reconhecendo, exclusivamente, células do cólon e das glândulas gástricas. A Con A apresentou uma intensa marcação nas regiões apicais das glândulas do cólon e do estômago, enquanto que a WGA reagiu, intensamente, nas células caliciformes e células de Paneth nas glândulas do epitélio intestinal. Conclusão: esses achados demonstram que a exposição ao etanol, leva a uma alteração dos padrões de reconhecimento das lectinas nas células do tecido gastrointestinal, bem como, um aumento a expressão gástrica das mucinas.

Objectives: in this work, lectin histochemistry was used to evaluate the expression of glycosaminoglycan (mucin) in gastrointestinal cells of rats exposed to ethanol. Method: Rats were exposed to ethanol (3g/kg of weight) during 15, 30 and 45 days. After perfusion, the stomach and intestine were formalin 10% fixed and the tissues were paraffin embedded. Slices (4mm) were incubated with peroxidase-conjugated lectins (PNA, WGA and Con A). Lectin staining was revealed with DAB-H2O 2followed by haematoxylin counterstaining. Periodic acid-Shiff (PAS)and Alcian Blue staining methods were used to evaluate glycosaminoglycan expression. Results: indicated that, in gastric mucosae, acid and neutral mucin expression rose progressively during ethanol exposition while in intestinal mucosae no considerable difference was observed in the number of PAS- and Alcian Blue-positive staining cells. All lectins presented an increasing binding pattern related to the period of ethanol exposure. PNA was the most selective lectin, recognizing exclusively colon cells and gastric glands. Con A presented an intense binding to the bottom region of the colon stomach glands while WGA intensely bound to the caliceform and Paneth cells in the intestinal glands. Conclusion: These jindings demonstrate that ethanol exposure led to a different pattern of lectin recognition of the cells of the gastrointestinal tissue.